儿茶提取物抗过敏反应的实验研究
时间:2007-07-29
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关键词:
目的 研究儿茶提取物抗过敏反应的作用。
    方法 采用大鼠同种被动皮肤过敏反应(PCA)。结果 儿茶提取物50mg/ml和25mg/ml两个剂量组的PCA抑制率分别是41.45%和45.52%;25mg/ml剂量组的PCA模型大鼠血清中IgE抗体水平下降。同时观察了抗原攻击前不同时间给予儿茶提取物的PCA抑制率变化,结果显示在抗原攻击前2h给予儿茶提取物PCA抑制率最大(46.2%)。
    结论 研究表明中药儿茶提取物对过敏反应有一定的抑制作用。

    过敏反应即Ⅰ型超敏反应
    由特异性IgE抗体介导产生的一种以机体生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。IgE抗体在过敏反应性疾病中起关键作用,近年来对如何抑制IgE抗体的问题一直颇受关注。本研究通过观察儿茶提取物对大鼠同种被动皮肤过敏反应(passive cutaneous anaˉphylaxis,PCA)的抑制率和体内IgE抗体水平的变化,研究其抗过敏反应的作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物 Wistar雄性健康大鼠,本校动物中心提供。

    1.1.2 主要试剂 儿茶提取物为本室用自建方法从中药儿茶中提取的药物有效成分。卵白蛋白(OVA)为美国Sigˉma公司产品。百日咳死菌苗购自北京生物制品研究所。抗大鼠IgE(mAb)抗体、生物素标记的抗大鼠IgE抗体、亲和素-HRP均为美国Pharmingen公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 抗血清的制备 取Wistar雄性健康大鼠8只,100~150g,于每只大鼠四肢足趾皮下注射OVA100μg及百日咳死菌苗10 10 个(溶于0.5ml N.S)。7天后追加免疫,于每只大鼠两大腿肌肉内注射OVA,每侧50μg/0.25ml N.S。14天后心脏采血,分离血清,置冰箱备用。

    1.2.2 大鼠PCA模型取Wistar雄性健康大鼠,150~200g,在乙醚麻醉下剪去背部毛,将1∶2稀释的上述血清皮内注射于鼠背部,每只注射两点,每点0.1ml。24h后进行抗原攻击,即尾静脉注射卵白蛋白1mg(溶于0.5%伊文思蓝溶液1ml中)。20min后处死动物,翻开背部皮肤,剪下蓝斑皮肤,每点以5ml丙酮生理盐水(3∶7V/V)浸泡48h,离心取上清液,测490nm光密度值,计算PCA抑制百分率。

    PCA抑制百分率=(对照组蓝斑光密度-用药组蓝斑光密度)/对照组蓝斑光密度 ×100%

    1.2.3 儿茶提取物抑制大鼠PCA的实验观察
    取Wistar雄性健康大鼠24只,随机分为4个组(A、B、C组为药物实验组。儿茶提取物浓度分别为50、25、10mg/ml,D组为PCA阳性对照组)。大鼠PCA模型制作方法同前。于抗原攻击前2h口服给予儿茶提取物,24h后进行抗原攻击,计算PCA抑制百分率。观察儿茶提取物的最佳作用剂量。另取Wistar雄性健康大鼠24只,随机分为4个组(A、B、C组为药物实验组,D组为PCA阳性对照组),A、B、C组分别在抗原攻击前0.5h、2h、4h口服给予儿茶提取物,剂量为25mg/ml,同法计算PCA抑制率。观察儿茶提取物不同给予时间对PCA抑制率的影响。

    1.2.4 血清IgE抗体的检测大鼠分组同上。
    乙醚麻醉大鼠,心脏取少量血,分离血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IgE抗体。96孔聚苯乙烯酶标板用5μg/ml的抗IgE(mAb)抗体包被,0.1ml/孔,放4℃冰箱过夜。用含0.5%明胶的PBS封闭2h,0.2ml/孔。加入待检血清0.1ml/孔,之后加入生物素标记的抗IgE抗体,0.1ml/孔,37℃孵育2h。然后加入亲和素-HRP,0.1ml/孔,之后加入0.5%OPD,0.1ml/孔,加入终止液后用酶标仪测OD 490 值。

    2 结果

    2.1 不同剂量儿茶提取物对大鼠PCA的影响
    结果显示,儿茶提取物50mg/ml和25mg/ml两个剂量组的PCA抑制率分别是41.45%和45.52%,随着浓度的降低作用效果减弱,说明儿茶提取物在一定剂量范围内对过敏反应有一定的抑制作用。

    2.2 不同剂量儿茶提取物对PCA大鼠血清IgE水平的影响 
    PCA模型大鼠给予儿茶提取物后,血清中IgE抗体水平呈下降趋势,其中25mg/ml剂量组的IgE抗体水平最低,此结果提示适当剂量的儿茶提取物可一定程度的抑制血清中的IgE抗体的产生。

    2.3 不同时间给予儿茶提取物对大鼠PCA抑制作用的影响
    在PCA诱发前0.5h、2h、4h分别给予25mg/ml的儿茶提取物,结果表明在抗原攻击前2h给予儿茶提取物后,色素渗出率最小,PCA抑制率最大,为46.2%。

    3 讨论

    过敏反应主要由特异性IgE抗体介导产生,可发生于局部或全身,反应发生快,消退也快,通常可使机体出现功能紊乱性疾病。临床上常用脱敏治疗控制过敏反应,但需要明确变应原方能进行。由于自然界变应原种类繁多,有时不易明确每一病例的变应原,从而妨碍治疗方案的制定。本研究结果显示儿茶提取物对大鼠PCA反应有一定的抑制作用,也可使IgE抗体水平下降,说明本儿茶提取物对过敏反应有一定的治疗作用,且不必预先明确变应原。其抗过敏反应的机制有待于进一步研究。
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