枇杷叶是传统的常用中药，具有止咳、清肺和胃、降气化痰之功效。研究表明，枇杷叶中含皂苷、苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、丁香素、枸橼酸盐、鞣质、维生素B 和维生素c等。熊果酸是一种五环三萜类化合物，具有抗肝炎、抗肿瘤、抗炎抑菌、降血脂、抗艾滋病、抗疟疾、抗糖尿病等多种生物活性，具有广泛的开发前景? 。近来研究还发现熊果酸是很好的免疫增强剂，具有较强的免疫增强作用和抗致癌、抗促癌、诱导Fq畸胎瘤细胞分化和抗血管生成等作用，且毒性小。所以熊果酸有望成为低毒有效的新型抗癌药。熊果酸在药用植物中分布广泛，尤以枇杷叶中含量较高 ，但对枇杷叶中熊果酸的提取分离研究。笔者尚未见报道。为了将资源优势转变成经济优势，笔者以枇杷叶为研究对象，通过提取、分离、纯化等步骤制得熊果酸，工艺简便易行，为熊果酸的工业化生产和综合利用枇杷叶资源提供了参考依据。

l 仪器与试剂

1．1 仪器Es—C600天平(湘仪天平仪器厂)；超声波振荡仪(上海Branson)；RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；电

热恒温水浴锅(北京医疗设备厂意成公司)；TG16一Ⅱ台式离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司)；高效液相色谱仪(液相色谱仪用HP agilent 1100，检测器用紫外可见检测器，SEPU色谱工作站3000)。

1．2 试剂95％ 乙醇(武汉宏大化学试剂厂生产，分析纯，符合GB679~4标准)；甲醇(天津市科密欧化学试剂开发中心提供，色谱纯)；石油醚(6o一9o℃ ，天津市科密欧化学试剂开发中心提供)；活性炭；熊果酸、齐敦果酸(中国药品生物制品检定所)；枇杷叶采自湖北恩施山区，干燥，粉碎备用；水为纯化水。

2 方法与结果

2．1 提取根据正交试验的结果 ，称取枇杷叶粉末[过6O目筛，筛孔内径(250士9．9) m]200 g置于烧杯中，用6倍量95％ 乙醇超声提取3次，每次30 rain。合并3次提取液，过滤除去残渣，减压回收乙醇，得浸膏18．7 g。

2．2 纯化将浸膏依次用石油醚、1％氢氧化钠水溶液、水洗至洗出液近无色，烘干。再用无水乙醇加热溶解，加活性炭回流脱色15 min，滤过。用热乙醇反复洗涤残渣，合并滤液及洗液，蒸去部分乙醇，放冷，静置，得白色片状结晶；过滤，滤饼加入甲醇，加热煮沸，趁热过滤，滤渣反复用乙醇重结晶得白色针状结晶(I)约0．85 g。

2．3 产物I的鉴定

2．3．1 一般鉴定①取结晶样品I约0．5 mg，加0．5 mL乙醇溶解，加0．5％对二甲氨基苯甲醛浓硫酸溶液2 mL，溶液呈褐色，加5滴水颜色变为褐橙色，加15滴水后变为紫红色。② 取结晶样品I约0．5 mg，加醋酐1 mL溶解后沿试管壁加入少量浓硫酸(不要搅乱两液接触面)，在两液层中间出现紫色环。

2．3．2 高效液相色谱法① 色谱条件：色谱柱为Reliasil型ODSC18柱(250 mm×4．6 mm，5 m)；流动相为甲醇：纯化水：冰醋酸：三乙胺(90 ：10 ：0．06 ：0．03)；检测波长为210nm；流速为0．6 mL·min一。测试方法为峰面积加大法。② 对照品溶液的配制：精密称取熊果酸对照品2．875 mg，用甲醇配制成浓度为115 trg·mL。的对照品溶液。③ 供试品溶液的配制：精密称取264．5 g结晶I，甲醇溶解并定容至2．0 mL，得供试品1。精密量取供试品1及115 Ixg·m 的对照品溶液各200 trL，混合均匀，得供试品2。④ 高效液相分析：分别精密量取对照品溶液 供试品1和供试品2溶液各20 ，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，在保留时间为17．292 min处出现一单峰。用面积归一化法计算供试品1的峰面积为94．15％ 。图谱见图1。

2．3．3 熔点的测定依照《中华人民共和国药典》(2000年版)第二部附录Ⅵc第一法测定样品、对照品及样品对照品混

合物的熔点，测试数据见表1。结果表明，供试品与对照品在同一高效液相色谱系统中同一时间出现一单峰，且熔点测定中混合熔点不下降。可以推定结晶I与熊果酸对照品为同一物质。